本发明涉及纯化的3-甲磺酰基丙腈或其药学可接受的盐,以及制备上述化合物的方法。该化合物纯度至少为90%(w/w)。本发明还涉及,包括该纯化的化合物和一种药物可接受的载体的药物组合物。本发明进一步涉及,一种通过将3-甲磺酰基丙腈或其药学可接受的盐或溶剂化物给药至有需要的对象,来治疗炎症、炎症相关疾病或疼痛的方法。
1.一种药物组合物,其包括一种药学可接受的载体和3-甲磺酰基丙腈的纯化的化合物,或其药学可接受的盐或溶剂化物:ntent="drawing" img-format="tif" inline="no" orientation="portrait" wi="595"/>其中该化合物纯度至少为90%(w/w)。
2.权利要求1所述的药物组合物,其中该化合物至少95%(w/w)纯。
3.根据权利要求1所述的药物组合物,其用于外用施用,且该化合物的含量约为0.5-10%(w/w)。
4.根据权利要求4所述的药物组合物,其为凝胶、霜剂、洗剂、液体、乳剂、软膏、喷雾剂、溶液或悬浮液的形式。
5.根据权利要求4所述的药物组合物,进一步包括二乙二醇单乙醚。
6.根据权利要求1所述的药物组合物,其为片剂、胶囊剂、颗粒剂、细粒剂、粉末剂、糖浆剂、栓剂或注射液的形式。
7.一种治疗炎症的方法,其包括步骤:鉴别患有炎症的对象,和将权利要求1所述的药物组合物以治疗炎症的有效量给药至该对象。
8.根据权利要求7所述的方法,其中该方法可减轻或缓解炎症的局部表现症状,其表现为急性或慢性肿胀、疼痛或发红。
9.根据权利要求7所述的方法,其中所述药物组合物通过局部给药或全身给药。
10.根据权利要求9所述的方法,其中所述药物组合物通过外用给药。
11.一种治疗疼痛的方法,其步骤包括:鉴别患有疼痛的对象,和将权利要求1所述的药物组合物以治疗疼痛的有效量给药至该对象。
12.一种治疗炎性骨骼或肌肉疾病或病症相关的炎症和/或疼痛的方法,其步骤包括:鉴别有需要的对象,和将权利要求1所述的药物组合物以治疗该炎症和/或疼痛的有效量给药至该对象,其中骨骼或肌肉疾病或病症选自如下一组:肌肉骨骼扭伤、肌肉与骨骼的过度劳累、肌腱病变、外周神经根病、类风湿关节炎、幼年型关节炎、痛风、强直性脊柱炎、牛皮癣关节炎、系统性红斑狼疮、肋软骨炎、肌腱炎、滑囊炎、颞颌关节综合征和纤维肌痛。
13.一种治疗关节、韧带、肌腱、骨骼、肌肉或筋膜相关的炎症和/或疼痛的方法,其步骤包括:鉴别有需要的对象,和将权利要求1所述的药物组合物以治疗关节、韧带、肌腱、骨骼、肌肉或筋膜相关的炎症和/或疼痛的有效量给药至该对象。
14.一种治疗炎性皮肤疾病或障碍相关的炎症和/或疼痛的方法,其步骤包括:鉴别有需要的对象,和将权利要求1所述的药物组合物以治疗该炎症和/或疼痛的有效量给药至该患者,其中该炎性皮肤疾病或障碍为皮炎或牛皮癣。
15.根据权利要求14所述的方法,其中所述皮炎为特应性皮炎或接触性皮炎。
16.根据权利要求14所述的方法,其中所述药物组合物通过外用给药。
17.一种制备3-甲磺酰基丙腈的方法,其步骤包括:(a)混合甲硫氨酸、卤化剂、和一种不溶于水的溶剂,该溶剂选自如下一组:乙酸乙酯、己烷、庚烷、二氯甲烷,和脂肪酸的酯,在0-35°C的温度下反应;(b)除去水相,得到有机溶剂相;和(c)除去有机溶剂,得到油状或固态的权利要求1所述的化合物。
18.根据权利要求16所述的方法,其中所述卤化剂是次氯酸盐。
19.一种制备3-甲磺酰基丙腈的方法,其步骤包括:(a)混合甲硫氨酸、乙酸乙酯和一种次氯酸盐水溶液,并在0-35°C的温度下反应至少12小时;(b)除去水相,得到乙酸乙酯相;和(c)除去乙酸乙酯,得到油状或固态的权利要求1所述的化合物。
20.一种制备3-甲磺酰基丙腈的方法,其步骤包括:(a)混合甲硫氨酸、乙酸乙酯和一种次氯酸盐水溶液,在0-35°C的温度下反应;(b)除去水相,得到乙酸乙酯相;(c)通过蒸馏、真空浓缩或氮吹减少乙酸乙酯相体积至原体积的1-20%;(d)向(c)的乙酸乙酯中加入乙醇;(e)除去步骤(d)中的乙酸乙酯,在得到乙醇中的权利要求1所述的化合物;(f)减少(e)中乙醇的体积,使该化合物从乙醇中沉淀并/或结晶为固体;和(g)分离该固体。技术领域
本发明涉及一种药物组合物,其包括一种药学可接受的载体和3-甲磺酰基丙腈化合物,或其药学可接受的盐,上述化合物被纯化至≥90%纯度。本发明还涉及制备上述化合物的方法和利用纯化的化合物治疗炎症或炎症相关疾病和疼痛的方法。
背景技术
炎症是一个过程,该过程由微生物或组织损伤引起多种细胞释放细胞因子和趋化因子,从而导致血管通透性增加、内皮素受体上调、并因此先天免疫系统和适应性免疫系统的多种细胞渗出增多,进入周围的组织,并产生炎症的典型现象,如发红、肿胀、发热和疼痛。炎症是活组织对伤害的一种局部反应,可能由各种内源和外源因素导致,外源因素包括物理因素、化学因素和生物因素,内源因素包括炎症介质、抗原和抗体,内源因素往往会在外源性损伤的影响下产生。炎症反应往往伴随着细胞膜结构和渗透性的改变。内源因素,即介质、抗原和自体抗原(autogen)决定了炎症反应的性质和类型,尤其是它在损伤区的进程。当组织损伤仅限于介质的产生时,发生的是一种急性炎症;如果还通过抗原、抗体和自体抗原的相互作用发生了免疫反应,则会发展慢性炎症。多种外源因子,如感染、损伤、辐射等,也会通过破坏细胞膜从而引发生化反应来从分子水平上提供炎症过程的进程。结缔组织持续受到压力和伤害,急性或长期的压力以及多种退行性疾病的自然发展都会造成关节部位的痛性炎症,如颈部、背部、手臂、臀部、踝部和脚部,这些痛苦很常见并且常常使人衰弱。目前的治疗针对炎症的部分或全部致病成分,例如,皮质类固醇有广谱活性,非甾体抗炎药(NSAID)则更有针对性地抗前列腺素和止痛。所有现有疗法均有相对高比例的副作用,但副作用剧烈而且严重。需要用于治疗炎症、炎症相关疾病和疼痛的组合物和方法,该组合物应当经济且易于生产,方法应当有效且没有显著副作用。
发明内容
本发明还涉及一种药物组合物,其包括一种药学可接受的载体和纯化的3-甲磺酰基丙腈化合物,或其药学可接受的盐,或其溶剂化物,上述化合物被纯化至至少≥90%(w/w)纯度。本发明还涉及一种治疗炎症、炎症相关疾病和疼痛的方法,该方法包括将3-甲磺酰基丙腈或其药学可接受的盐给药至需要的对象。上述包括活性化合物的药物组合物可以以任何可接受的给药方式施用,包括外用、口服以及消化道外给药(例如静脉、肌肉、皮下或直肠给药),优选外用给药和口服给药。纯化的3-甲磺酰基丙腈可以用以下方法制备,其步骤包括:(a)混合甲硫氨酸、一种不溶于水的有机溶剂和一种卤化剂,在0-35°C的温度下反应;(b)除去水相,得到有机溶剂相;和(c)除去有机溶剂以获得油状或固态的化合物。纯化的3-甲磺酰基丙腈还可以用以下方法制备,其步骤包括:(1)混合甲硫氨酸、乙酸乙酯和一种次氯酸盐水溶液,在0-35°C的温度下反应;(b)除去水相,得到乙酸乙酯相;(c)通过蒸馏、真空浓缩或氮吹来减少乙酸乙酯相体积至原体积的1-20%;(d)向(c)的乙酸乙酯中加入乙醇;(e)除去步骤(d)中的乙酸乙酯并得到在乙醇中的化合物;(f)减少(e)中乙醇的体积,使化合物从乙醇中沉淀并/或结晶为固体;和(g)分离该固体。此方法适合大规模制备,且得到的化合物纯度很高(至少99%)。
附图说明
图1说明实施例1产物的总离子色谱(高效液相色谱-总离子色谱,HPLC-TIC)。图2说明实施例1产物的质谱分析结果(高效液相色谱-质谱,HPLC-MS)。
具体实施方式
定义本文中“加合物”指两种或多个不同分子直接加合的产物,得到包含所有组分的所有原子的单一反应产物。“加合离子”形成自前体离子并包含该离子的所有组成原子以及额外的原子或分子,加合离子常常在质谱仪离子源中形成。本文中“药学可接受的盐”指保留母体化合物的所需生物活性并没有不需要的毒理效应的盐。药学可接受的盐形式包括各种结晶多晶型以及不同盐的非结晶形式。药学可接受的盐可以和金属或有机平衡离子形成,包括但不限于,碱金属盐如钠或钾,碱土金属如镁或钙,以及铵或四烷基季铵盐如NX₄₊(此处X是C_1-4)。本文中“溶剂化物”指一种加成络合物,在其中化合物与可接受的共溶剂以某固定比例相结合,共溶剂包括但不限于乙酸乙酯、十二烷基乳酸酯、十四烷基乳酸酯、十六烷基乳酸酯、十四酸异丙酯、甲醇、乙醇、1-丙醇、异丙醇、1-丁醇、异丁醇、叔丁醇、丙酮、甲基乙基酮、乙腈、苯、甲苯、二甲苯、乙二醇、二氯甲烷、1,2-二氯乙烷、N-甲基甲酰胺、N,N-二甲基甲酰胺、N-甲基乙酰胺、吡啶、二恶烷和二乙醚。纯化的化合物本发明涉及一种纯化的3-甲磺酰基丙腈化合物:ntent="drawing" img-format="tif" inline="no" orientation="portrait" wi="593"/>本发明还涉及3-甲磺酰基丙腈的药学可接受的盐或其溶剂化物。上述化合物优选纯度为至少85%、90%、95%、97%、98%或99%。发明人发现3-甲磺酰基丙腈可以用这样的方法制备,其步骤包括:(a)混合甲硫氨酸、一种不溶于水的有机溶剂和一种卤化剂,在0-35°C的温度下反应;(b)除去水相,得到有机溶剂相;和(c)除去有机溶剂以获得油状或固态的化合物。甲硫氨酸可以是L型甲硫氨酸、D型甲硫氨酸或两者的混合物。可用于本发明的卤化剂包括氟化剂、氯化剂和溴化剂。卤化剂的例子有次氯酸盐、氯胺T,氯气、溴化氢、三溴化磷、五溴化磷和1-氯甲基-4-氟-1,4二氮杂双环[2.2.2]辛烷双(四氟硼酸盐)。氯化剂优选次氯酸盐(如次氯酸钠),商业漂白剂高乐氏(ntent="drawing" img-format="tif" inline="yes" orientation="portrait" wi="280"/>)含有约6%的次氯酸盐,可以用做卤化剂。可用于本发明的不溶于水的有机溶剂优选极性为约0.1-7.5的半极性或非极性溶剂,如乙酸乙酯、己烷、庚烷、二氯甲烷、正丁醇、十二烷基乳酸酯、十四烷基乳酸酯、十六烷基乳酸酯或十四酸异丙酯,不溶于水的有机溶剂优选乙酸乙酯。反应步骤(a)在0°C至环境温度下进行,例如0-35°C,优选4-30°C,更优选22-28°C。反应优选在碱性条件下进行,例如pH7.1-14,优选pH7.2-9或pH7.5-8。在一种实施方式中,甲硫氨酸为固态并与不溶于水的有机溶剂和卤化剂水溶液混合,优选在惰性气体下进行混合,如氩。在一种优选的实施方式中,固态甲硫氨酸先与不溶于水的有机溶剂混合,然后将卤化剂水溶液加入该快速搅拌的悬浊液,上述有机溶剂的体积超过水的至少约2倍、5倍、或10倍。本申请中“约”指所述值的±15%,例如,有机溶剂的体积是水的体积的约2-20倍、3-10倍、或4-6倍。甲硫氨酸与次氯酸盐在水中的反应非常快,难于控制,多出的有机溶剂能减缓反应速度,使反应更可控且可重复。反应时间取决于生产的规模,至少为1小时、2小时、4小时、8小时、或12小时。反应时间通常为2-24小时,或4-16小时,或8-16小时。方便起见反应通常过夜进行。在一种次优选的实施方式中,将卤化剂水溶液加入甲硫氨酸(固态或水溶液)并彻底混合,然后立即加入有机溶剂,在甲硫氨酸/卤化剂反应之后,反应产物在有机溶剂中分离。(a)步骤的混合可以通过任何方式机械混合,例如,叶轮搅拌器、剪切混合(sheerxa0mixing)、旋转混合等。步骤(a)反应完成后,静置水-有机溶剂混合物,可通过技术人员已知的任何方式将有机相和水相分离,如倾析或移液,得到含有反应产物的有机溶剂萃取物和硫酸钠。有机相优选在硫酸钠存在下收集,以除去残留的水分。任选地通过过滤、倾析、离心或技术人员已知的任何方式除去有机溶剂萃取物中的任何不溶性残留物和硫酸钠。室温下(22-28°C)该反应产物在有机溶剂中稳定(无显著氧化或水解)至少1个月,优选3个月,更优选6个月或一年。在典型的反应中,使用10-200克甲硫氨酸,200毫升-4升3-12%(如6%)次氯酸盐。在典型的萃取中,使用约1-20升或更多的不溶于水的有机溶剂。上述试剂的量可以等比例增大或减小。在一种优选的实施方式中,不溶于水的有机溶剂选用乙酸乙酯。在除去水相后,通过本领域技术人员已知的任何方式除去乙酸乙酯溶剂,例如,可以通过蒸发来除去乙酸乙酯溶剂,如旋转蒸发或氮气下烘干。在除去乙酸乙酯溶剂后,得到油状或固态的3-甲磺酰基丙腈,储存在密封容器中(如带盖的小瓶或瓶子),室温下(22-28°C)稳定至少1-3个月。在除去乙酸乙酯溶剂后,固体产物用输液质谱(infusionxa0massspectroscopy)、高效液相色谱-质谱(HPLC-MS)、飞行时间高分辨率质谱(Timexa0ofxa0Flightxa0Highxa0resolutionxa0MS)、元素分析、¹H核磁共振、¹³C核磁共振和傅里叶变换红外光谱法(FTIR)确认为3-甲磺酰基丙腈。在除去乙酸乙酯溶剂后,3-甲磺酰基丙腈油状或固态产物通常纯度达到至少80%(w/w)。该产物可以被进一步纯化来除去杂质,通过制备色谱法如薄层色谱、柱层析和高效液相色谱(HPLC)、重结晶、溶剂洗脱或其他合适的方法,优选的纯化方法包括薄层色谱和快速柱色谱。纯化后3-甲磺酰基丙腈的纯度至少约85%或90%或93%或95%或98%或99%,纯化过程的合成产率通常是15-40%。在另一种实施方式中,3-甲磺酰基丙腈还可以用以下方法制备,其步骤包括:(1)混合甲硫氨酸、乙酸乙酯和一种次氯酸盐水溶液,在0-35°C的温度下反应;(b)除去水相,得到乙酸乙酯相;(c)通过蒸馏、真空浓缩或氮吹来减少乙酸乙酯相体积至原体积的1-20%(如5-10%);(d)向(c)的乙酸乙酯中加入乙醇;(e)除去步骤(d)中的乙酸乙酯并得到在乙醇中的化合物;(f)减少(e)中乙醇的体积,使化合物从乙醇中沉淀并/或结晶为固体;和(g)分离该固体。该固体可以是无定形粉末或结晶形式。在上述方法中,在步骤(c)和(d)之间,任选地由一个合适的方法干燥乙酸乙酯溶液以除去残留的水,如用硫酸镁干燥。在步骤(d)中,加入乙醇的体积与乙酸乙酯的相同或过量,如乙醇的体积可以是乙酸乙酯的1-10倍(优选1-5倍或1-3倍)。在乙酸乙酯相中加入乙醇,并在真空或氮吹下对乙酸乙酯进行共沸置换(azeotropicxa0displacement),通过真空浓缩、氮吹或蒸馏来减少乙醇的体积(步骤(e))。在从乙醇溶液中沉淀并/或结晶得到固体后,该固体可以通过真空过滤分离,分离的固体可以用适当的方法进行干燥,如空气干燥或真空干燥,该固体还可以通过重结晶、重悬浮/沉淀、和/或柱纯化来进一步纯化,以获得大于98或99%的纯度。药物组合物本发明提供了包括一种或多种药学可接受的载体和3-甲磺酰基丙腈、或其药学可接受的盐、或其溶剂化物的药物组合物,该药物组合物中的活性化合物3-甲磺酰基丙腈、或其药学可接受的盐、或其溶剂化物的含量通常为:对外用制剂,约0.01-20%或0.05-20%或0.1-20%或0.2-15%或0.5-10%或1-5%(w/w);对于注射制剂,约0.1-5%;对于贴剂,0.1-5%;对于片剂,约1-90%;对于胶囊制剂,1-100%。在一种实施方式中,将活性化合物加入任何可接受的载体,包括霜剂、凝胶剂、洗剂或可以稳定该活性化合物并可通过外用而将活性化合物递送至患病区域的其他类型的悬浊液。在另一种实施方式中,该药学组合物可以是以下剂型,如片剂、胶囊剂、颗粒剂、细粒剂、粉末剂、糖浆剂、栓剂、注射液、贴剂等。上述药物组合物可通过常规方法制备。药学可接受的载体为非活性成分,可以由本领域技术人员用常规标准进行选择。药学可接受的载体包括但不限于,非水基溶液、悬浊液、乳状液、微乳液、胶束溶液、凝胶和软膏,药学可接受的载体还可以包含的成分包括但不限于,盐水和电解质水溶液;离子和非离子的渗透剂,如氯化钠、氯化钾、甘油和葡萄糖;pH调节剂和缓冲液,如氢氧化物、磷酸盐、柠檬酸盐、乙酸盐、硼酸盐和三乙醇胺,其盐;抗氧化剂,如亚硫酸氢盐、亚硫酸盐,焦亚硫酸钠、硫代亚硫酸盐、抗坏血酸、乙酰半胱氨酸、半胱氨酸、谷胱甘肽、丁基羟基苯甲醚、二丁基羟基甲苯、生育酚和抗坏血酸棕榈酸酯,其盐、酸和/或碱;表面活性剂如卵磷脂、磷脂质,包括但不仅限于磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺和磷脂酰肌醇;泊洛沙姆(poloxamers)和ploxamines,聚山梨酸酯,如聚山梨酯80、聚山梨酯60和聚山梨酯20,聚醚,如聚乙二醇和聚丙二醇;乙烯类聚合物,如聚乙烯醇和聚维酮;纤维素衍生物,如甲基纤维素、羟丙基纤维素、羟乙基纤维素、羧甲基纤维素和羟丙基甲基纤维素和它们的盐;石油衍生物,如矿物油和白矿脂;脂肪,如羊毛脂、花生油、棕榈油、大豆油;甘油单、双和三酯;丙烯酸的聚合物,如羧基聚亚甲基凝胶,和经疏水改性的交联丙烯酸酯共聚物;多糖如葡聚糖,和葡糖胺聚糖,如透明质酸钠。这些药学可接受的载体可以用众所周知的防腐剂防止细菌感染,其包括但不限于苯扎氯铵、乙二胺四乙酸及其盐、苄索氯铵、氯己定、氯丁醇、对羟基苯甲酸甲酯、乙基汞硫代水杨酸钠和苯乙醇,或可以配置成供单次或多次使用的非保存制剂。例如,3-甲磺酰基丙腈的片剂或胶囊剂中可以含有不具生物活性且不与活性化合物反应的其他辅料,片剂的辅料可以包括填充剂、粘合剂、润滑剂和助流剂、崩解剂、润湿剂,和释放速率调节剂。粘合剂可以促进制剂颗粒的粘附,对片剂很重要。粘合剂的例子包括但不限于,羧甲基纤维素、纤维素、乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、甲基纤维素、刺梧桐树胶、淀粉、淀粉、和黄蓍胶、聚(丙烯酸)和聚乙烯基吡咯烷酮。例如,3-甲磺酰基丙腈的贴片制剂中可以含有非活性成分,如1,3-丁二醇、二羟基氨基乙酸铝、乙二胺四乙酸二钠、D-山梨糖醇、明胶、高岭土、对羟基苯甲酸甲酯、聚山梨酯80、聚维酮、丙二醇、对羟基苯甲酸丙酯、羧甲基纤维素钠、聚丙烯酸钠、酒石酸、二氧化钛和纯净水,贴片制剂中还可以含有皮肤渗透性增强剂,如乳酸酯(如十二烷基乳酸酯)或二乙二醇单乙醚。包含3-甲磺酰基丙腈的外用制剂可以是凝胶、霜剂、洗剂、液体、乳剂、软膏、喷雾剂、溶液和悬浊液的形式。外用制剂中的非活性成分如,包括但不限于,十二烷基乳酸酯(润肤剂/渗透促进剂)、二乙二醇单乙醚(润肤剂/渗透促进剂)、二甲基亚砜(增溶剂)、硅酮弹性体(流变/质地调节剂)、辛/癸酸甘油三酯、(润肤剂)、水杨酸辛酯、(润肤剂/紫外线过滤剂)、硅氧烷液体(润肤剂/稀释剂)、角鲨烯(润肤剂)、葵花子油(润肤剂)和二氧化硅(增稠剂)。在一种实施方式中,外用凝胶制剂中含有十二烷基乳酸酯(如,约0.1-10%、或约0.2-5%、或约0.5-5%),十二烷基乳酸酯在外用制剂中被认为是安全的,十二烷基乳酸酯在医药产品和化妆品中可供人使用,十二烷基乳酸酯用在外用制剂中可增加化合物的渗透性。十二烷基乳酸酯优选纯化到≥90%,优选≥95%的纯度;高的纯度可以减少水解和氧化剂的存在。另外,0.1-20%或0.5-10%(w/w)二甲基亚砜在该制剂中可为3-甲磺酰基丙腈提供合适的溶解度。在另一种实施方式中,外用凝胶制剂中含有二乙二醇单乙醚。使用方法炎症是一种组织病理学的过程和状态,其由免疫系统的先天和后天成分的激活和活性延续而产生。细胞间相互作用中的花生四烯酸级联和细胞因子的产生和作用是免疫激活和应答中的关键组分,免疫激活和应答可导致炎症。花生四烯酸在许多细胞膜中存在,当花生四烯酸从细胞膜上切除时,可产生许多已知的类花生酸(eicosinoids),包括前列腺素和白细胞三烯,它们是已知的促炎性物质。申请人发现,在体外3-甲磺酰基丙腈可以阻止人外周血单核细胞释放促炎性细胞因子(如IL-1β、IL-6、TNFα、IL-4和IFNγ)。申请人发现,当外用施用于小鼠耳肿胀模型时3-甲磺酰基丙腈有抗炎作用,该模型中用花生四烯酸诱导炎症。申请人发现,含有3-甲磺酰基丙腈的凝胶剂在大鼠和小型猪的14天皮肤毒性研究中耐受性良好。对大鼠和狗的口服、全身毒性给药之后,唯一观察到的反应为轻微生理反应,包括体温下降、呼吸频率下降、血压升高和心率增加,这些反应在剂量超过预期人类治疗剂量的2000倍时被观察到,说明该化合物在全身治疗使用中耐受性良好。本发明涉及一种治疗炎症和/或疼痛的方法,活性化合物3-甲磺酰基丙腈可直接使用,或可以另外包括药学可接受载体的药物组合物的形式给药。该方法包括以下步骤,先鉴别患有炎症和/或疼痛的对象,再将3-甲磺酰基丙腈以治疗炎症和/或疼痛的有效量给药至该对象。本发明中“有效量”是指该用量能通过改善病情或减轻症状来有效治疗疾病。在一种实施方式中,上述方法减轻或缓解了与炎症相关的症状。本发明提供了一种治疗炎症的局部表现的方法,其表现为急性或慢性肿胀、疼痛、发红、温度升高或在某些情况下丧失功能。在另一种实施方式中,本发明提供了一种缓解疼痛症状的方法,无论疼痛的原因。本方法可以治疗的概括性术语“痛”包括创伤性疼痛、神经性疼痛、器官疼痛和与疾病相关的疼痛。创伤性疼痛包括损伤所致的疼痛、手术后疼痛和炎症疼痛;神经性疼痛包括神经性和特发性疼痛综合征和与神经病变相关的疼痛,如糖尿病神经病变、灼痛、臂丛撕脱、枕神经痛、纤维肌痛、痛风和其他形式的神经痛;器官疼痛包括眼、角膜、骨骼、心脏、皮肤/烧伤、内脏(肾、胆囊等)、关节和肌肉疼痛;与疾病相关的疼痛包括与癌症、艾滋病、关节炎、疱疹和偏头痛相关的疼痛。本发明能够减轻不同程度的疼痛,即轻度、中度和重度疼痛,急性和慢性疼痛。本发明可有效地治疗关节疼痛、肌肉疼痛、肌腱疼痛和烧伤疼痛。在优选实施方式中,本发明可用于治疗在肌肉骨骼系统或皮肤相关的炎症和/或疼痛。骨骼肌肉系统和皮肤系统高度受神经支配,有很强的显示疼痛的能力,另外,骨骼肌肉系统有很强的组织肿胀的能力,皮肤有很强的发红、肿胀、发热的能力。在肌肉骨骼系统和皮肤系统中,组织损伤的程度所造成的炎症反应常常被不成比例地放大,例如在皮肤中,仅仅用力撞击就可引起细胞因子、白介素-1(IL-1)和肿瘤坏死因子(TNF)的释放。本发明提供了一种治疗炎性骨骼或肌肉疾病或病症相关炎症和/或疼痛的方法,该方法包括以下步骤,鉴别需要治疗的对象,将活性化合物以治疗炎症和/或疼痛的有效量给药至该对象。骨骼或肌肉疾病或病症包括骨骼肌肉扭伤、肌肉与骨骼过度劳累、肌腱病变(tendonopathy)、外周神经根病、类风湿关节炎、风湿性多肌痛、幼年型关节炎、痛风、强直性脊柱炎、牛皮癣关节炎、系统性红斑狼疮、肋软骨炎、肌腱炎、滑囊炎——如常见的肱骨外上髁炎(网球肘)、内侧髁炎(投手肘)和粗隆部滑囊炎,颞颌关节综合征和纤维肌痛。本发明提供了一种治疗炎性皮肤病(如皮炎和牛皮癣)相关炎症和/或疼痛的方法,该方法包括以下步骤,鉴别需要治疗的对象,将该活性化合物以治疗炎症和/或疼痛的有效量给药至对象。皮肤对环境刺激的反应性很高,角质细胞的表皮成分是花生四烯酸和促炎性细胞因子白介素-1(IL-1)和肿瘤坏死因子(TNF)的丰富来源。皮肤树突状细胞——郎格罕氏细胞(Langerhansxa0cells)——为各种淋巴细胞的进一步免疫反应识别和处理抗原,所有这些细胞主要通过其特定的细胞表面受体来受细胞因子调控。皮炎(又称湿疹)是皮肤炎症的统称,皮炎的特定类型包括特应性、接触性、钱币状和光诱导性。接触性皮炎有两种类型,非特异性刺激性类型和抗原特异性过敏类型。两者都涉及先天和后天免疫系统应答,包括花生四烯酸和细胞因子成分,其通过表皮细胞、巨噬细胞、树突状细胞、嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞和各种T和B淋巴细胞产生的类花生酸和/或细胞因子部分在细胞间通信来启动和传播疾病。特应性皮炎最终是一种Th2淋巴细胞特别介导的疾病。特应性皮炎的引发剂是表皮角质细胞的的刺激物、花生四烯酸和细胞因子的释放。已确定类花生酸抑制剂如前列腺素抑制剂和细胞因子抑制剂如环孢素、他克莫司(tacrolimus)和各种特异性细胞因子受体单克隆抗体能减轻特应性皮炎的症状。当前公认牛皮癣是由对表皮的某些类型的伤害或微生物刺激引发,造成花生四烯酸和细胞因子的释放,并启动和传播不适当的免疫反应,引起该疾病。各种类花生酸和细胞因子抑制剂,如前列腺素抑制剂和环孢素,和更新的针对特定的细胞表面细胞因子受体的单克隆抗体,已被证明可以改善该疾病。3-甲磺酰基丙腈对抑制花生四烯酸诱导的炎症和抑制促炎性细胞因子的释放有效,对治疗牛皮癣和皮炎相关的炎症和/或疼痛,特别是接触性皮炎和特应性皮炎也有效。本发明的药物组合物可以局部用药和全身用药,局部用药包括外用给药,全身用药包括口服、消化道外给药(例如静脉、肌肉、皮下或直肠)和其他全身给药途径。在全身用药中,活性化合物首先到达血浆,然后被分布到靶组织。局部给药和口服给药是本发明的优选给药途径。该组合物的剂量可以根据损伤程度和每个患者个体反应的不同而有所差异。对于全身给药,递送的活性化合物的血浆浓度可以变化,但通常为1x10^-10-1x10^-4摩尔/升,优选1x10^-8-1x10^-5摩尔/升。在一种实施方式中,将该组合物外用施用于患处并揉入,根据医疗问题和疾病病理是慢性还是急性,该组合物外用施用至少每天一或两次,或每天三到四次。一般情况下,外用组合物包括约0.01-20%或0.05-20%或0.1-20%或0.2-15%、0.5-10或1-5%(w/w)的该活性化合物,例如,外用组合物包括约1或5%(w/w)的活性化合物。根据患处的大小,每次对个体施用剂量为0.2-85毫升,通常0.2-10毫升的外用组合物。该活性化合物透过皮肤被递送至不适部位。在一种实施方式中,将该药物组合物口服给药于患者,用于口服给药的剂量一般为1-50,优选1-5毫克/千克/天。在一种实施方式中,将该药物组合物皮下给药于患者,用于皮下给药的剂量一般为0.3-20,优选0.3-3毫克/千克/天。本领域技术人员将理解,许多递送机制同样适用于本发明。本发明可用于治疗哺乳动物患者,如人、马和狗,本发明尤其可用于治疗人。下列实施例进一步阐述本发明,这些实施例仅仅是为了阐述本发明而不应解释为限制性的。实施例实施例1.产品的制备(起始材料15克)称量DL-甲硫氨酸(大约15克,100毫摩尔)入2升反应烧瓶,添加1.5升试剂级乙酸乙酯至该烧瓶,并通过机械方式快速搅拌,向该悬浊液中加入310毫升ntent="drawing" img-format="tif" inline="yes" orientation="portrait" wi="297"/>漂白剂(约6%次氯酸钠),盖上该烧瓶并在室温下继续搅拌约18小时。将该混合物转移至分液漏斗中,排出下层水相,将有机层用硫酸钠干燥以除去水,然后过滤并用225毫升乙酸乙酯洗涤。将有机相加入到一个2升锥形瓶中,并用氮吹浓缩至体积为约230毫升,将其转移到一个0.5升锥形瓶中用5毫升乙酸乙酯漂洗,并通过氮吹进一步浓缩为米白色粉末,用于分析。该材料被证实为纯度97%的3-甲磺酰基丙腈的钠加合物(见实施例3)。实施例2.产品的制备(起始材料109克)称量DL-甲硫氨酸(大约109克,716毫摩尔)入20升反应器,该反应器装有10.9升试剂级乙酸乙酯,向该快速搅拌的悬浊液中加入2200毫升(2420克)ntent="drawing" img-format="tif" inline="yes" orientation="portrait" wi="278"/>漂白剂(1951毫摩尔),盖上该反应器并在室温下继续搅拌约18小时。停止搅拌,并将该混合物静置30分钟,放掉下面的水层。将有机层用硫酸镁干燥,过滤并用大约2升的额外的乙酸乙酯洗涤,这使得有机相大约为13升。在30毫巴、浴温22°C、冷凝器温度-4°C下,将有机相以增量方式加入到6升旋转蒸发器,直到其被浓缩到初始体积的约5%(大约0.65升)。加入等体积乙醇溶液(无水,美制酒精度200,>99.5%,ACS试剂),并通过保持容器体积(约1.3升)增量增加乙醇进行乙酸乙酯共沸置换,这导致白色固体在乙醇中沉淀。将所得悬浮液过滤、用乙醇洗涤并干燥,收集该固体为18.3克纯度92%的材料(批次1)。将滤液冷冻过夜,这导致额外的固体沉淀物形成,通过真空过滤收集该固体沉淀物、用乙醇洗涤并干燥至产率4.2克纯度96%(批次2)。在500毫升圆底烧瓶中合并第一和第二批次与250毫升乙醇,加热至55-60°C,并缓慢冷却至5±3°C。在两小时陈化后,对产品的悬浮液进行过滤、用冷乙醇洗涤、真空干燥,得到21.3克纯度99.7%的固态材料。该材料的纯度和鉴定(3-甲磺酰基丙腈的钠加合物)通过实施例3中描述的高效液相色谱-质谱得到确认。实施例3.产品鉴定为3-甲磺酰基丙腈通过输液质谱法、高效液相色谱-质谱Pos模式、飞行时间高分辨率质谱、元素分析、¹H和¹³C核磁共振和傅里叶变换红外光谱法分析实施例1的分离产物。1.高效液相色谱-质谱高效液相色谱-质谱仪器参数列于下表1。表1ntent="drawing" img-format="tif" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/>ntent="drawing" img-format="tif" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/>收集从75至500AMU(原子质量单位)得到总离子光谱。总离子流色谱图(图1)表明,根据曲线下的总面积,测试样品的纯度为96.76%(在12.3分钟)。图2是图1中12.3分钟的峰的质谱图。图2描绘了信号强度对质量电荷比(与分子量直接相关),图2描绘了主要分离离子为156.1AMU、次要离子为134.1,这与产物为分子量(M)133.1的3-甲磺酰基丙腈是一致的,质谱测定为M+1(M+质子,134.1)和M+23(M+钠,156.1,钠加合物)。2.TOF高分辨率质谱TOF高分辨率质谱仪器参数列于下表2。表2ntent="drawing" img-format="tif" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/>ntent="drawing" img-format="tif" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/>飞行时间(TOF)高分辨率HPLC-MS色谱图在12.3分钟处的峰包含光谱质荷比(m/z)为156.0078的离子。在色谱峰12.3分钟处光谱中质荷比156.0078观察到的该离子可能是钠加合物,该钠加合物的元素组成为C₄H₇NO₂S+Na,其误差为10.9ppm。该高分辨率TOF数据支持HPLCES-MS数据,表明实施例1的试验样品是分子量为133AMU的3-甲磺酰基丙腈。3.元素分析元素分析数据结果,元素组成为36.385%C、5.560%H、10.304%N、25.14%S,为该化合物的元素组成为C₄H₇NO₂S提供了支持数据。4.¹Hxa0NMR¹Hxa0NMR仪器参数列于下表3.表3溶剂
CD₃OD
发射核
质子
光谱仪频率(sfrq)(兆赫兹)
399.798
温度(°C)
25
D1(sec)
5
旋转(赫兹)
20
处理(1D)LB(赫兹)
0.2
采集点数(#pointsxa0acquired)
35k
Pw(us)
6
处理规模(Processingxa0size)(fn)
64k
扫描宽度(sw)(千赫兹)
7
扫描次数(nt)
40
¹Hxa0NMR谱(图1D)由Spectralxa0Dataxa0Services,Inc在400兆赫兹下CD₃OD溶液中得到,¹Hxa0NMR谱由三个分离的、可积分的信号组成,如表4所示。表4ntent="drawing" img-format="tif" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/>也有中心位于3.307ppm的特征性CD₃OD多重峰,及轻微的杂质峰在:~1.1ppm(RIV=0.11);~2.1ppm(RIV=0.16);~4.2ppm(RIV=0.08);~4.6ppm(RIV=0.02);4.79ppm(RIV=0.08)。¹Hxa0NMR谱表示如下所示的一般结构,其中包括:(a)相邻的亚甲基基团,其中每一个基团连接到一个特定的吸电子基团/杂原子(b)一个单独的甲基,其连接到一个吸电子基团/杂原子:ntent="drawing" img-format="tif" inline="no" orientation="portrait" wi="409"/>X和Y是吸电子基团/杂原子5.C¹³NMRC¹³NMR仪器参数列于下表5。表5溶剂
CD₃OD
发射核
碳
光谱仪频率(sfrq)(兆赫兹)
100.590
温度(°C)
25
D1(sec)
5
旋转(赫兹)
0
处理(1D)LB(赫兹)
3
采集点数(#pointsxa0acquired)
17664
ntent="drawing" img-format="tif" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/>¹³Cxa0NMR谱由Spectralxa0Dataxa0Services,Inc在100兆赫兹下CD₃OD溶液中得到,¹³Cxa0NMR谱由四个分离的、可积分的信号组成,如表6所示。表6ntent="drawing" img-format="tif" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/>¹³Cxa0NMR谱表明4种特定类型的碳原子,仅当结构1中的X或Y是碳时该数据可佐证¹Hxa0NMR数据。118ppm处的线是腈基的特征峰,即Y=CN。其余两个信号暗示碳原子连接到除氧以外的杂原子,因为该化合物由甲硫氨酸作为起始原料的化学过程产生,所以有理由认为X原子为硫,从而得到以下结构:ntent="drawing" img-format="tif" inline="no" orientation="portrait" wi="423"/>结构A考虑到所采用的化学方法(用过量的次氯酸钠以漂白剂水溶液的形式处理甲硫氨酸),S-氧化是不可避免的,从而得到以下结构:ntent="drawing" img-format="tif" inline="no" orientation="portrait" wi="428"/>ntent="drawing" img-format="tif" inline="no" orientation="portrait" wi="425"/>结构Bxa0xa0xa0xa0结构C所得质谱显示了在质荷比156处的主离子和质荷比134处的次离子,后者离子与正模式下得到的C结构的母离子是一致的,即M+1,而前者离子可能是钠离子加合物(M+23)。高分辨率质谱为C结构提供了进一步支持,其提供的精确质量为156.0078,这与分子式C₄H₇NaNO₂S是一致的。因此,质子和碳13核磁共振谱支持3-甲磺酰基丙腈的结构。6.傅里叶变换红外光谱(FTIR)傅里叶变换红外光谱(FTIR)仪器参数列于下表7。表7光谱反射探头
有
扫描范围(cm-1)
650-4000
模式(mode)
%T
模式范围(%)
26.8-100
FTIR数据(图1F)描绘的光谱与腈官能团的存在一致,该官能团在2255.7cm^-1有ntent="drawing" img-format="tif" inline="yes" orientation="portrait" wi="99"/>伸缩振动,在1129.5和1276.5处有强条带,ntent="drawing" img-format="tif" inline="yes" orientation="portrait" wi="304"/>存在一致。由此产生的光谱支持3-甲磺酰基丙腈的结构。实施例4.凝胶制剂1表8示范了一种包含3-甲磺酰基丙腈的凝胶制剂。表8ntent="drawing" img-format="tif" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/>ntent="drawing" img-format="tif" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/>实施例5.凝胶制剂2表9示范了另一种包含3-甲磺酰基丙腈的凝胶制剂。表9ntent="drawing" img-format="tif" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/>实施例6.3-甲磺酰基丙腈的抗炎和镇痛活性(预示实施例)根据实施例5制备纯化的3-甲磺酰基丙腈(MSPN,根据实施例2制备)的凝胶制剂。试验材料:MSPN凝胶制剂(1-5%)、吲哚美辛(阳性对照)和载体(无活性化合物的凝胶制剂),在卡拉胶诱导的大鼠爪子水肿炎症模型中评估抗炎和镇痛活性。本实验中使用大鼠。皮下注射卡拉胶(0.1毫升的1%悬浊液)于左后爪以引起炎症,在卡拉胶给药后1.5、2.5和3.5小时在爪子外用施用0.05、0.1、0.15或2.0毫升的MSPN(1-5%)或载体凝胶,在卡拉胶给药1小时前口服给药吲哚美辛5毫克/千克。用体积描记器测量爪子体积以确定炎症的程度(水肿或肿胀),用vonxa0Frey细丝进行机械刺激使爪子回缩来测量镇痛的效果,卡拉胶给药4小时后测量炎症程度和镇痛效果。MSPN预计将有抗炎和/或镇痛的性能,这可以分别由与载体对照组相比(t检验,p<0.05)爪子体积的显著减少和/或引起爪子回缩所需的机械压力的显著提高来测得。实施例7.3-甲磺酰基丙腈的镇痛活性(预示实施例)根据实施例5制备纯化的3-甲磺酰基丙腈(MSPN,根据实施例2制备)的凝胶制剂。试验材料:凝胶制剂中的活性化合物(1-5%)、吗啡(阳性对照)和载体(无活性化合物的凝胶制剂),在大鼠热板模型中评价镇痛活性。本实验中使用大鼠。MSPN(1-5%)或载体凝胶外用施用于爪子,给药量为0.05、0.1、0.15或2.0毫升。一小时后,将大鼠放置在55°C的热板上,测量舔爪子的时间。热板测试前一小时,按30毫克/千克口服给药阳性对照——吗啡。MSPN预计将有镇痛的性能,与载体对照组相比这可以由舔爪子时间的显著增加来测得(t-test,p<0.05)。实施例8.膝痛的治疗(预示实施例)目标:在暂时停止标准非甾体抗炎药(NSAID)疗法后,在有骨关节炎相关的轻度至中度膝关节疼痛的患者中,研究3-甲磺酰基丙腈的凝胶制剂的疗效。配方:本实施例中使用包含1%和5%的3-甲磺酰基丙腈的凝胶制剂(实施例5),安慰剂包含相同的无该活性化合物的凝胶。方法:随机、双盲、安慰剂对照、平行治疗的多中心二期临床活性研究。膝盖患有疼痛性骨关节炎的患者,用稳定剂量的标准非甾体抗炎药(NSAID)疗法控制至少2个月,在7天清洗期内停止使用NSAID。然后将患者按1:1:1的比例随机分组(1%活性凝胶组、5%活性凝胶组、安慰剂组),总共150名患者参加并进行了7天治疗,在8、10、14和21天后随访。该活性凝胶或安慰剂每天3次施用于患处膝盖,在清醒时每4-6小时施用一次,7天内共21次。患者治疗7天,随后随访14天,NSAID可在第10天随访后重新开始。评定标准:安全:●整个研究期间的不良事件(AE)●在参加时(-7天,NSAID清洗期开始)、基准日(第1天,治疗开始)、第10天和第21天的体检●在参加时(-7天,NSAID清洗期开始)、基准日(第1天,治疗开始)和第2、4、8、10、14和21天的生命体征●在基准日(第1天)、第8天和第14天的临床化验室测量临床活性:主要临床活性参数是在施用部位测量疼痛,用VAS和Westernxa0Ontarioandxa0McMasterxa0University(WOMAC)级别定量,记录对膝盖的肿胀、压痛和炎症的治疗效果,还记录治疗后减轻或消除疼痛的时间。研究终点:主要临床活性终点为:●WOMAC功能障碍指数从基准日(第1天)到第8天的变化:○疼痛(0-20级)○硬度(0-8级)○身体机能(0-68级)次要临床活性终点为:●VAS疼痛等级(1-100)从基准日(第1天)到第8天的变化。●第2天和第3天VAS疼痛等级的日内变化,通过从每日基准(第一次治疗前)到第二次治疗后30分钟的变化来测量。●从基准日(第1天)到第1天首次用药后30分钟和60分钟,肿胀、压痛和炎症的变化,由研究者来评价。●从基准日(第1天)到第8天,肿胀、压痛和炎症的变化,由研究者来评价。●每次外用施用活性凝胶或安慰剂凝胶之后,疼痛减轻或消除的时间。●使用急救药物(APAP)。实施例9.细胞因子活性的抑制测试3-甲磺酰基丙腈(MSPN,根据实施例2制备)对从人外周血单核细胞(PBMC)释放细胞因子(体外)的影响。PBMC分泌的细胞因子在炎症反应中起着重要的作用。新鲜的人PBMC培养液中加入162μM(22微克/毫升)MSPN,一式两份。一小时后,用有丝分裂原脂多糖和伴刀豆球蛋白A(刀豆素A)刺激PBMC分泌细胞因子。用50pg/mL脂多糖刺激白介素IL-1β、IL-6和肿瘤坏死因子TNFα的释放,用20微克/毫升刀豆素A刺激IL-4的释放,用5微克/毫升刀豆素A刺激干扰素IFNγ。用皮质类固醇地塞米松(100nM)作为阳性对照。温育24小时后,用路明克斯(Luminex)微珠(Bead)试剂盒检测上清液的细胞因子。22微克/毫升的MSPN抑制IL-1β、IL-6、TNFα、IL-4和IFNγ的释放分别达95%、98%、98%、7%和21%,地塞米松抑制IL-1β、IL-6、TNFα、IL-4和IFNγ的释放分别达24%、60%、42%、93%和87%。结果表明,MSPN对在炎症过程中涉及的细胞因子具有显著的抑制作用。实施例10.3-甲磺酰基丙腈在小鼠中的抗炎活性纯化的3-甲磺酰基丙腈(MSPN,根据实施例2制备)溶解于载体(乙醇/丙酮1:1)至5%(w/v)。在局部花生四烯酸诱导的小鼠耳肿胀模型中评价该活性化合物、吲哚美辛(作为阳性对照溶于载体中)和载体的抗炎活性。本实验中使用体重22±2克的ICR衍生的雄性小鼠。每组(活性化合物组、阳性对照组和载体组)使用5只小鼠。所有动物在使用前至少一周保持在控制温度(22-24°C)和湿度(60%-70%)的环境中,并采用12小时光照/黑暗周期。将花生四烯酸(2毫克溶于20微升丙酮)局部施用于受试动物右耳的前面和后面来诱导炎症。在花生四烯酸诱发前30分钟和诱发后15分钟,分别施用溶于载体的MSPN(20微升)、溶于载体的0.3毫克吲哚美辛和载体(20微升)。在花生四烯酸诱导耳廓肿胀90分钟后,测量左耳和右耳的厚度,计算出的差值为右耳发炎的迹象。显著活性定义为,相对于载体治疗组,花生四烯酸诱导的耳廓肿胀减少(抑制)≥30%。相对于载体治疗组(丙酮:乙醇/1:1),MSPN和吲哚美辛都在90分钟后显著减轻了由花生四烯酸诱发的耳肿胀(分别为31和60%)。MSPN治疗的小鼠与载体治疗的小鼠之间的差异也被确定为统计学显著(t检验确定p值<0.05)。实施例11.MSPN制剂的全身给药本研究是为了确定给大鼠口服和皮下途径给药后的MSPN系统(血浆)暴露程度。用于口服给药,MSPN在水中制备;用于皮下给药,MSPN在盐水中制备。本研究中使用体重282到295克的大鼠。雄性大鼠(n=2)按单剂量50、160或500毫克/千克通过口服和皮下途径给药;雌性大鼠(n=2)仅按单剂量500毫克/千克通过口服和皮下途径给药。在0.25、1、2、3、4、6、12、24和48小时后从每只大鼠抽血并通过LC/MS/MS测定MSPN的浓度。对于雄性,口服给药50、160和500毫克/千克后测得的平均最大血浆浓度(Cmax)分别为160、560和12,000微克/毫升;皮下给药后分别为160、760和3300微克/毫升。对于雌性,口服给药500毫克/千克后平均Cmax为3800微克/毫升,皮下给药500毫克/千克后为9500微克/毫升。两种途径和两种性别的半衰期很接近,从8到15小时不等。上述结果表明,MSPN在口服和皮下途径都有显著生物利用度。实施例12.治疗人类韧带、肌腱、肌肉、关节、骨骼和筋膜产生的疼痛和/炎症材料:提供给每个患者包含5%的3-甲磺酰基丙腈的凝胶制剂(见实施例5)。膝关节的治疗A患者为73岁男性,右膝有长期的损伤并做过3次手术。在2天的滑雪后,患者的右膝肿胀并疼痛,沿着右膝外面的肌腱有特别的不适,在膝盖骨底部下方也有明显压痛感。膝盖周长为167/8英寸。A患者在右膝上施用5%凝胶制剂两次,间隔7小时。第二次用药3小时后,膝盖无明显的肿胀,膝盖骨下无疼痛,外韧带只剩有轻微的不适。治疗后膝盖周长为163/8英寸,减少了1/2英寸。手指的治疗A患者还有长期的左手手指关节炎,特别是中指。A患者的中指有明显的肿胀、不适和令人困扰的僵硬,并无法弯曲手指超过45°。中指关节周长为35/16英寸。A患者在中指上施用5%凝胶制剂一次。治疗后约9小时,患者注意到,手指的僵硬被缓解并不再有其它不适。A患者能够完全弯曲中指握成闭合的拳头。治疗后中指关节周长为215/16英寸,减少了3/8英寸。颈部的治疗B患者为74岁女性,15年前在颈部植入了神经刺激器并做了神经减压手术,15年来B患者并无疼痛。2011年,15年前同样的疼痛又回来了。B患者使用5%凝胶制剂治疗了一次,揉入后,她又在颈部放了一个加热垫约一小时。B患者记录道,在下一次用药前,疼痛和不适减轻了几个小时。B患者每天重复3次该治疗,持续2天,每次都记录到其疼痛减轻。C患者为88岁男性,在挥动一6磅的室内训练高尔夫球杆后拉伤了其下颈部背面的肌肉,3小时后疼痛剧烈。C患者施用5%凝胶制剂,当时C患者记录道在1-10级疼痛中为10级(10级为最痛)。在接下来的四小时中疼痛依然剧烈,C患者记录到这段时间内,疼痛仅仅降至8级。接着第二次施用了5%凝胶制剂,在随后的6个小时之后,C患者说疼痛已下降为4级。然后第三次施用了5%凝胶制剂,4小时后,C患者记录道疼痛降为1级,并保持了6个小时,这时第四次也是最后一次用药。在随后的6小时内所有疼痛都消除了。D患者为59岁男性,骑了约30英里自行车后,D患者加重了颈部的关节炎和下颈部背面的肌肉过度劳累。施用5%凝胶制剂仅一次后,D患者在一小时内感到疼痛和僵硬明显减轻。肩部的治疗E患者为58岁男性,E患者打高尔夫球之后,左肩在肌腱套下二头肌内出现和经历疼痛达七天,E患者继续打高尔夫球,其损伤没有愈合。E患者连续3天每天2次施用5%凝胶制剂,同时继续打高尔夫球。每次施用5%凝胶制剂后,E患者感到疼痛立刻减轻,3天后所有疼痛和炎症都消除了。手和手指的治疗F患者为74岁男性,F患者打高尔夫球时拉伤了拇指肌腱,F患者感到难以忍受的疼痛并在拇指上可见肿胀。打完高尔夫后,F患者立即在其拇指患处施用了5%凝胶制剂,四小时之内,疼痛显著减轻,拇指可活动的范围有所改善。四小时后临睡前,F患者又施用了一次,疼痛和肿胀继续减轻。第二天早上,疼痛完全消失,肿胀也被消除。G患者为72岁男性,其手指患有慢性关节炎,G患者的右手拇指关节炎发作。无明显的肿胀,但有强烈的疼痛弥漫到整个拇指,疼痛强烈到其右手无法使用。G患者在其整个右手拇指上施用了5%凝胶一次,并按摩约5分钟,6小时后所有疼痛都消失了。腕部的治疗F患者还患有腕部的慢性疼痛和炎症,也被称为痛风样症状。当F患者感到腕部疼痛和炎症时,每天三次在腕部施用5%凝胶制剂,每六小时一次共2天。首次用药一小时后,F患者感到症状减轻,2天后,疼痛和不适都消除了。F患者已进行多次该治疗。踝关节的治疗F患者还在右踝患有慢性跟腱炎,当踝关节发病时,通常需要10天至两周的“周期”恢复正常。当患者在踝部每天三次施用5%凝胶达2天时,恢复正常的“周期”减少了一半的天数。胸部的治疗H患者为55岁女性,患有慢性肋软骨炎。H患者发病时,胸骨部位经历尖锐的刺痛和压痛,疼痛使其虚弱数天。在疼痛发作时,H患者在疼痛区域施用5%凝胶制剂,每六小时一次共2到4天。在首次用药2小时内,疼痛大幅减轻。治疗24小时(3次用药)后,H患者的衰弱感和触痛感被消除。用药第二天依然有钝痛,钝痛在反复用药后被消除,H患者遂停止治疗。筋膜的治疗I患者为85岁女性,其右脚患有慢性足底筋膜炎。当她遭受疼痛发作时,I患者在其脚底施用5%凝胶制剂并按摩约5分钟,I患者通常在晚上临睡前进行该治疗,并在白天当数小时不用脚时再进行一次。治疗三小时后,患者感到疼痛初步减轻,治疗24小时内疼痛可消除。本发明及其制备和使用的方式和方法已用完整、清楚、简明和准确的术语作了描述,使任何属于本领域的技术人员能够同样制备和使用。应理解的是,以上所述只是本发明的优选实施方式,在不背离本权利要求书中所述的发明范围前提下可以作出改变或修正。为特别指出并明确要求本发明的主题,以下权利要求书对本说明书给予了总结。